Xét nghiệm sinh hóaXét nghiệm ngày tiết họcXét nghiệm tụ máu - miễn dịchXét nghiệm nước tiểu - vi sinhXét nghiệm di truyền và SHPT
*

*

*

*

*

Nhóm thiết bị làm cho lạnhNhóm thiết bị làm cho nóngNhóm máy cơ họcNội thất phòng thí nghiệmCân/pH/Lọc/Pipet/Bơm...

Bạn đang xem: Sắc ký cột là gì, cách sử dụng sắc ký cột trong thí nghiệm

Bạn vẫn xem: Sắc ký kết cột là gì

Hóa hóa học cơ bản/phân tíchHóa hóa học sinh họcSinh phẩm xét nghiệmPipet/Vật tứ tiêu haoHóa hóa học sinh học phân tửCác nghệ thuật phân tíchCác kỹ thuật lấy mẫuPhân nhiều loại môi trườngCác dự án môi trường xung quanh - chuyển nhượng bàn giao công nghệMôi ngôi trường và cuộc sống vuonxavietnam.net

Sắc cam kết cột là kỹ thuật diện tích lớn nhất trong số phòng thí nghiệm. Phương thức này rất đơn giản và hoàn toàn có thể phân lập những hợp hóa học khỏi tất cả hổn hợp một cách nhanh chóng. Tuy nhiên, giống hệt như nhiều nghệ thuật hóa học thực hành khác, để sở hữu thể thiết lập cấu hình và chạy một cột sắc cam kết nhanh và công dụng lại bắt buộc đến những năm ghê nghiệm. Bài viết này tất cả đề cập đến một số trong những cách khiến cho bạn tối ưu hóa các thông số thí nghiệm để bạn cũng có thể phân bóc tốt nhất những hợp hóa học của mình. Một khi bạn đã lựa chọn được hệ dung môi phân tách, tính được lượng silica bạn cần và tìm ra được cột cân xứng (xem trong bài xích "Kinh nghiệm lựa chọn: Sắc ký kết cột – Phần 1"), khi ấy bước tiếp theo của chúng ta là nhồi cột.

Trong một cột tiêu biểu (Hình 1), trộn tĩnh – hóa học hấp thụ rắn thường là silica gel (SiO2) hoặc alumina (Al2O3) được nhồi vào cột chất thủy tinh thẳng đứng. Pha rượu cồn – dạng lỏng, được rót vào từ trên đỉnh cột và chảy xuống dưới cột nhờ tính năng của trọng lực hoặc của áp suất bên phía ngoài (trong sắc cam kết cột nhanh – flash chromatography). Quy trình phân tách bóc các chất giành được nhờ kỹ năng hấp thụ khác biệt và liên hệ giữa pha động và trộn tĩnh.


Hình 1. tùy chỉnh cột nói chung

Chất lượng của quá trình phân tách bóc phụ nằm trong vào những yếu tố buổi tối thiểu để tránh tạo nên thành láng khí trong pha tĩnh. Để tránh chế tác thành nhẵn khí, bài toán nhồi cột đúng cách dán là vô cùng quan trọng.

1. Sàng lọc Silica hay Alumina mang lại Pha tĩnh

Silica với alumina rất nhiều là phần lớn chất tiêu thụ phân cực nên những cấu tử phân rất hơn trong láo lếu hợp có khả năng sẽ bị giữ lại mạnh hơn trong trộn tĩnh và do đó sẽ đi thoát ra khỏi cột sau cùng.

Silica rất có thể dùng cho hầu như các phù hợp chất, nhưng lại sở hữu tính axit nhẹ, nó thích hợp với các thích hợp chất gồm tính bazơ. Alumina tất cả tính kiềm nhé, đề nghị lực link với những hợp chất tất cả tính axit mạnh khỏe hơn phù hợp để tách bóc các hợp chất phân rất yếu hoặc trung bình cùng tinh chế những amin.

Kích thước của hạt dung nạp bị ảnh hưởng bởi dung môi chảy quả cột. Silica với alumina hiện có khá nhiều loại kích thước.

Kích thước được tính bằng cực hiếm mesh – là số lỗ lọc sản xuất thành trong một đơn vị silica, để chắt lọc chất hấp phụ. Vì giá trị mesh càng tốt chẳng hạn như “silica gel 230–400” sẽ có rất nhiều lỗ lọc trên một đối chọi vị diện tích s hơn và tất nhiên kích thước hạt sẽ bé dại hơn loại "silica gel 60". Thông thường, một số loại silica gel 70-230 mesh hay được sử dụng trong sắc ký kết cột hay (tách bởi trọng lực) và silicagel 230-400 mesh sử dụng trong sắc ký kết cột nhanh.Alumina tất cả 3 loại I, II và III. Phân loại này dựa vào hàm lượng nước có trong alumnia, nhiều loại I gồm ít nước duy nhất và các loại III là những nhất. Lượng chất nước ít bao gồm nghĩa là có khá nhiều hạt phân rất trong alumina từ do liên kết với những hợp chất hữu cơ hơn, và các hợp chất phân cực sẽ giữ lại được lại trên cột lâu hơn. Alumina một số loại II cùng III, kích cỡ 150 mesh hay sử dụng nhiều nhất.

Kỹ thuật nhồi cột tế bào tả sau đây sử dụng trộn tĩnh là silica, tuy nhiên cũng rất có thể áp dụng cùng với alumina.

2. Sẵn sàng cột

Một số cột bao gồm lớp lọc thủy tinh frit (hình 2, bên trái) nhằm tránh thất thoát trộn tĩnh từ lòng cột; các loại khác không tồn tại và rất cần phải có lớp đệm bông thủy tinh hoặc bông vải vóc ở mặt đáy cột. Dùng nhiều loại nào là tùy bạn. Đặt thêm lớp vải chất liệu thủy tinh hay lớp bông vải vóc nghe dường như lạ tuy nhiên với lỗ lọc thủy tinh trong frit khó khăn làm sạch rộng và rất có thể gây lây truyền tạp, ví dụ như silica nhỉ qua lỗ thanh lọc frit vào trong phân đoạn thu hồi. Để tránh hiện tượng này rất có thể cho thêm 1 lớp cát ở thân lỗ lọc frit và silica. Mật độ, size lỗ thanh lọc frit cũng không giống nhau. Nghĩa là vận tốc dòng dung môi ở những cột không giống nhau rất có thể khác nhau. Loại lớp lọc frit béo sẽ có tác dụng rò rỉ nhiều silica hơn, nhưng các loại lỗ nhỏ hơn hoàn toàn có thể cho vận tốc dòng thấp rộng – thỉnh thoảng là hết sức thấp – và hoàn toàn có thể dẫn đên tạo áp lực đè nén trong sắc ký kết cột nhanh.


Hình 2. Cột tất cả lớp thanh lọc frit (trái) và không tồn tại lớp thanh lọc frit (phải)

Cột có lớp thanh lọc frit

Chọn một cột có size phù hợp, rửa thật sạch, tráng cùng với nước cất và sấy khô.Kẹp cột thẳng vực dậy giá với đóng van ở bên dưới cột lại (trên hình 2).Cho vào một lớp cát mỏng tanh (khoảng 0,5cm, nếu muốn).

Xem thêm: Hướng Dẫn Cắt Tóc Bằng Tông Đơ Chuyên Nghiệp Tại Nhà, 6 Bước Cắt Tóc Bằng Tông Đơ Cho Người Mới Bắt Đầu

Cột không có lớp lọc frit

Miếng đệm bông vải vóc hoặc tua thủy tinh yêu cầu đủ rộng lớn để bít được đáy của cột, cơ mà không được rộng quá với chặt quá sẽ làm cản trở cái chảy của dung môi (hình 3). Một mảnh có form size bằng ngón tay út là đủ dùng.

Vị trí của miếng đệm bông giỏi sợi thủy tinh phải đảm bảo an toàn nằm chắc chắn là ở phần khiêm tốn nhất của cột bằng cách dùng đũa chất thủy tinh hoặc vẻ ngoài khác nén xuống.Kẹp cột thẳng vực dậy giá với đóng van ở phía bên dưới cột lại (trên hình 2)Thêm một lớp cat vào cột (khoảng 2cm, Hình 3). Điều này bảo đảm an toàn pha tĩnh một lớp nền và phòng sự tập trung và không tiếp tục do lớp vải bông khi những chất đi ra ở cuối cột.


Hình 3. gợi ý chọn kích cỡ của miếng đệm bông vải giỏi sợi chất liệu thủy tinh và lượng cát cân xứng cho cột không có lớp lọc frit

3. Nhồi cột

Có một số phương pháp nhồi cột. Mỗi cách thức đều gồm ưu nhược của nó, bạn nên thử cả 3 phương pháp đề tra cứu ra cách thức phù vừa lòng nhất.

Cách 1: Nhồi cột khô dạng hình 1

Dụng cụ đề xuất thiết:

Cột sẽ được sẵn sàng như tại phần 2

Phễu phù hợp dùng cho hóa học rắn khô

Van để đóng cột

Dung môi

Silica hoặc Alumina

Ưu điểm +

Nhược điểm -

Giảm thiểu quy trình rửa cột

Khó đạt được công dụng nhồi cao nhất

Cách làm:

Cho dung môi vào cột, mang lại chạy qua cat và miếng tối bông vải để loại bong bóng khí trong số ấy (Hình 4, bước B)Đặt phễu khô trên đỉnh cột với đổ nhàn silica hoặc alumina (pha tĩnh) vào vào dung môi này. Để dung môi chảy ra ung dung tránh bị tràn (hình 4, cách C)Để trộn tĩnh lắng xuống cùng nhẹ nhàng đóng van cột lại nhằm silica/alumina được nhồi chặt vào cột (Hình 4, cách D)Tháo dung môi tới mức chạm vào mặt phẳng pha rắn (hình 4, cách E)


Hình 4.Phương pháp nhồi cột khô vẻ bên ngoài 1

Cách 2: Nhồi cột khô đẳng cấp 2

Dụng cụ nên thiết:

Cột đã được sẵn sàng như ở phần 2

Phễu phù hợp dùng cho chất rắn khô

Dây dẫn chân không

Dung môi

Silica hoặc Alumina

Ưu điểm +

Nhược điểm -

Nhồi cột chặt

Cần không hề ít dung môi

Cách làm:

Thêm silica gel khô vào cột với nối chân không bằng cách nối ống quyển không vào cổng output của cột (hình 5, cách B). Chân không sẽ giúp quá trình nén silica gel và giữ nó định hình cho bước tiếp theo. Quá trình nhồi sẽ tốt hơn khi được vỗ dịu lên thành cột (hình 5, bước C)Khi tạo ra độ chân ko rồi, rót rảnh dung môi vào (Hình 5, cách D)Để dung môi tung qua cột tới khi chảy cho đáy cột. Tại điểm này, đóng van cùng tắt chân không (Hình 5, bước E)Để dung môi qua cột với lượng khoảng 5 – 6 lần lượng dung môi đầy cột để đảm bảo an toàn hoàn thành quá trình nhồi cộtTháo dung môi tính đến khi nút dung môi vào cột chạm vào bề mặt pha tĩnh (hình 5, cách F)


Hình 5.Phương pháp nhồi cột khô giao diện 2

Cách 3: Nhồi cột kiểu ướt (huyền phù)

Dụng cụ nên thiết:

Cột đang được sẵn sàng như ở phần 2

Phễu cân xứng dùng cho chất rắn ướt

2 cốc tất cả mỏ hoặc bình tam giác

Que khuấy thủy tinh

Dung môi

Silica hoặc Alumina

Pipet Pasteur

Ưu điểm +

Nhược điểm -

Nhanh và dễ dàng

Cho hiệu quả rửa tốt nhất

Cách làm:

Rót dung môi vào khoảng 1/3 môi trường cột (Hình 6, bước B)Dùng cốc có mỏ, đong lượng silica/alumina vừa đủTrong bình bội phản ứng hoặc cốc bao gồm mỏ, đong lượng dung môi gấp khoảng chừng 1,5 lần lượng silicaThêm silica vào dung môi, từng ít một, vừa thêm vừa rung lắc nhẹ, thực hiện pipet Pasteur hoặc đũa thủy tinh để khuấy lên.Rót hoặc sử dụng pipet nhằm thêm các thành phần hỗn hợp silica cùng dung môi vào cột. Để dung môi thoát thoát khỏi cột kị bị tràn (Hình 6, bước C)Gõ dịu vào cột để bọt bong bóng khí bay ra với silica lắng xuống (Hình 6, cách D)Tiếp tục đổ hỗn hợp vào cột đến khi tất cả lượng silica/alumina hết.Rửa thành cột bằng cách rót dung môi lên thành trong của cột.Mở van túa dung môi cho đến lúc mức dung môi trong cột chạm đến mặt phẳng của pha tĩnh (Hình 6, bước E)


Hình 6. Nhồi cột loại ướt

Như vậy bạn đã có cột nhồi chuẩn bị sẵn sàng cho việc bóc hỗn phù hợp yêu cầu.

4. Làm cho sạch cột

Sau khi đạt được sản phẩm tách ra, các bước còn lại là đổ silica ra và có tác dụng sạch cột mang đến lần bóc tách tiếp theo. Để làm nhanh quá rình, vấn đề rửa giải loại trừ dung môi hoàn toàn có thể dùng thứ nén khí và cho dòng khí đi qua cột khoảng 2 giờ. Quá trình này sẽ có tác dụng khô silica, từ kia đổ thoát ra khỏi cột dễ dàng hơn nhiều.

Sau lúc rửa giải tất cả các dung môi với giữ cột trực tiếp đứng, úp ngược vào trong cốc tất cả mỏ lớn, để khô qua tối trong tủ hút.

Thường chỉ cần làm sạch mát cột bởi nước với axeton là đủ.

Lưu ý: Bụi silica khôn xiết độc khi hít phải, luôn xử lý silica ở bên trong gầm tủ hút với mặc quần áo phù hợp để bảo vệ phiên bản thân. Tránh quá trình làm tăng những vết bụi khi xử lý.

Bài viết liên quan

Trả lời

Email của bạn sẽ không được hiển thị công khai. Các trường bắt buộc được đánh dấu *