HPLC là gì?

HPLC được viết tắt bằng: High Performance Liquid Chromatography, giờ đồng hồ Việt: Sắc ký lỏng tính năng cao

Nguyên lý chuyển động máy HPLC

Sắc cam kết lỏng HPLC là 1 trong kỹ thuật để tách bóc hỗn hợp những chất thành các thành phần của chúng trên cơ sở cấu tạo phân tử cùng thành phần phân tử của chúng;Điều này liên quan đến pha tĩnh (chất rắn hoặc chất lỏng được hỗ trợ trên hóa học rắn) cùng pha động (chất lỏng hoặc chất khí). Pha rượu cồn chảy qua trộn đứng yên với mang các thành phần của hỗn phù hợp với nó. Những thành phần chủng loại hiển thị các tương tác dạn dĩ hơn với trộn tĩnh sẽ di chuyển chậm hơn qua cột so với những thành phần có liên tưởng yếu hơn.

Bạn đang xem: Sắc ký là gì? các kỹ thuật sắc ký và phương pháp sắc ký phổ biến


*
Sơ đồ nguyên lý cơ phiên bản hệ thống sắc ký kết lỏng hiệu năng cao HPLC

NỘI DUNG BÀI VIẾT

Sắc cam kết lỏng hiệu năng cao (HPLC) là gì?

Nguyên tắc, loại, thiết bị với ứng dụng

Phân nhiều loại sắc cam kết lỏng HPLC

HPLC trộn thông thường
HPLC pha đảo
HPLC vứt bỏ kích thước
HPLC hội đàm ion

Các thành phần bao gồm của hệ thống sắc ký kết lỏng hiệu năng cao

Dung môi
Bơm - thành phần phân phối dung môi
Bộ tiêm mẫu
Cột HPLCĐầu dò - Detector
Thiết bị tích lũy dữ liệu

Các áp dụng của HPLC


*

Hệ thống ACQUITY UPLC H-Class PLUS

*

Hệ thống ACQUITY PREMIER


Sắc ký lỏng tính năng cao (HPLC) là gì?

Nguyên tắc, loại, sản phẩm công nghệ và ứng dụng của HPLC

Sự khác biệt về tỷ lệ này tạo ra sự phân bóc nhiều thành phần. Việc phân bóc sắc ký hoàn toàn có thể được triển khai bằng nhiều phen tĩnh, bao hàm silica thắt chặt và cố định trên những tấm chất liệu thủy tinh (sắc ký lớp mỏng), khí dễ cất cánh hơi (sắc ký khí), giấy (sắc ký kết giấy) và hóa học lỏng (sắc ký lỏng).Sắc ký lỏng cao ápSắc ký kết lỏng hiệu năng cao (HPLC) về cơ phiên bản là một dạng sắc cam kết lỏng cột được cải tiến cao.Thay bởi dung môi được phép nhỏ tuổi giọt sang 1 cột bên dưới trọng lực, nó bị ép qua áp suất cao lên đến 400 atm. Điều đó tạo cho nó cấp tốc hơn nhiều.Tất cả các phân tách sắc ký, bao hàm HPLC hoạt động theo thuộc một hiệ tượng cơ bản; tách bóc một mẫu mã thành các bộ phận cấu thành của nó bởi sự khác hoàn toàn về ái lực tương đối của các phân tử không giống nhau so với pha rượu cồn và pha tĩnh được sử dụng trong quy trình tách.Phân loại1. HPLC pha thông thườngPhương pháp này phân bóc tách các hóa học phân tích trên cửa hàng phân cực. NP-HPLC áp dụng pha tĩnh phân rất và pha đụng không phân cực. Vì đó, pha tĩnh hay là silica và những pha di động điển hình là hexane, methylene clorua, chloroform, dietyl ete với hỗn hợp những chất này.Do đó, những mẫu cực được giữ giàng trên bề mặt cực của cột đóng góp gói lâu hơn các vật tư ít cực hơn.2. HPLC pha đảoPha tĩnh là không rất (kỵ nước) vào tự nhiên, trong lúc pha động là chất lỏng phân cực, chẳng hạn như hỗn vừa lòng nước với metanol hoặc acetonitril. Nó vận động dựa bên trên nguyên tắc địa chỉ kỵ nước do đó vật liệu càng không phân cực thì nó sẽ tiến hành giữ lại càng lâu.3. HPLC loại trừ kích thướcCột được lấp đầy bằng vật tư có kích cỡ lỗ được kiểm soát đúng chuẩn và những hạt được phân tách theo size phân tử của nó. Các phân tử béo hơn nhanh chóng được cọ qua cột; các phân tử bé dại hơn thâm nhập vào bên trong xốp của các hạt đóng gói với rửa giải sau đó.4. HPLC hội đàm ionPha tĩnh có bề mặt mang năng lượng điện ion tích điện trái lốt với các ion mẫu. Chuyên môn này được sử dụng gần như độc quyền với những mẫu ion hoặc ion hóa.Điện tích trên mẫu càng khỏe mạnh thì có khả năng sẽ bị hút to gan lớn mật hơn vào mặt phẳng ion và vị đó, sẽ mất không ít thời gian hơn để rửa giải. Pha cồn là hỗn hợp đệm, trong số ấy cả p
H với cường độ ion được sử dụng để kiểm soát thời gian rửa giải

Các thành phần thiết yếu của hệ thống sắc ký kết lỏng tính năng cao

1. Dung môiNội dung pha cầm tay được chứa trong một resorvoir thủy tinh. Pha động, hoặc dung môi, trong HPLC thường là lếu hợp các thành phần chất lỏng phân cực và không phân cực có nồng độ tương ứng thay đổi tùy ở trong vào thành phần của mẫu.2. Bơm - phần tử phân phối dung môiMột máy bơm hút pha rượu cồn từ resorvoir dung môi cùng buộc nó đi qua cột và bộ phát hiện hệ thống. Tùy trực thuộc vào một số yếu tố bao hàm kích thước cột, form size hạt của pha tĩnh, vận tốc dòng chảy và thành phần của pha động, áp suất vận hành lên cho tới 42000 k
Pa (khoảng 6000 psi) có thể được tạo nên ra.3. Cỗ tiêm mẫuNgười tiêm rất có thể là một mũi tiêm 1-1 hoặc một khối hệ thống tiêm trường đoản cú động. Một kim phun cho khối hệ thống HPLC sẽ cung cấp việc tiêm mẫu hóa học lỏng vào phạm vi 0,1-100 m
L thể tích cùng với độ tái lập cao và dưới áp suất cao (lên mang lại 4000 psi).4. CộtCột thường được thiết kế bằng thép không gỉ đánh bóng, nhiều năm từ 50 mang lại 300 mm với có 2 lần bán kính trong trường đoản cú 2 đến 5 mm. Bọn chúng thường cất đầy một trộn đứng yên ổn với kích thước hạt là 3 trận10.Các cột có 2 lần bán kính trong nhỏ dại hơn 2 mm thường được hotline là cột microbore. Lý tưởng duy nhất là ánh nắng mặt trời của pha rượu cồn và cột phải được giữ không đổi trong quá trình phân tích.5. Đầu dò - DetectorMáy dò HPLC, nằm ở cuối cột phát hiện các chất đối chiếu khi bọn chúng rửa giải trường đoản cú cột sắc đẹp ký. Những máy dò hay được thực hiện là máy quang phổ UV, huỳnh quang, thứ quang phổ khối với máy năng lượng điện hóa.6. Thiết bị thu thập dữ liệuTín hiệu từ đồ vật dò có thể được thu thập trên đồ vật ghi biểu đồ gia dụng hoặc cỗ tích hợp năng lượng điện tử khác nhau về độ phức hợp và kỹ năng xử lý, lưu trữ và cách xử lý lại tài liệu sắc ký. Laptop tích phù hợp phản ứng của máy dò với từng thành phần với đặt nó vào trang bị sắc ký kết dễ đọc cùng diễn giải

Các áp dụng của HPLC

Thông tin hoàn toàn có thể thu được bằng HPLC bao hàm độ phân giải, nhấn dạng và định lượng của vừa lòng chất. Nó cũng cung cấp trong việc bóc tách hóa chất và tinh chế. Các ứng dụng không giống của HPLC bao gồm:

*

Hệ thống Breeze QS HPLC

*

Hệ thống HPLC Alliance

Ứng dụng dược phẩm 1. Để điều hành và kiểm soát sự bình ổn của thuốc.2. Phân tích giải thể máy tính bảng của dạng chế tao dược phẩm.3. Kiểm soát chất lượng dược phẩm.Ứng dụng môi trường1. Phát hiện những hợp hóa học phenolic nội địa uống.2. Theo dõi và quan sát sinh học các chất ô nhiễm.Ứng dụng trong Pháp y1. Định lượng dung dịch trong chủng loại sinh học.2. Khẳng định steroid trong máu, nước tiểu, vv3. So với pháp y về dung dịch nhuộm dệt may.4. Xác định cocaine và các loại thuốc lạm dụng khác trong máu, nước tiểu, v.v.Thức ăn uống và hương thơm vị1. Đo lường chất lượng nước giải khát cùng nước.2. Phân tích con đường trong nước nghiền trái cây.3. Phân tích các hợp hóa học đa vòng vào rau.4. So với bảo quản.Ứng dụng vào xét nghiệm lâm sàng1. Phân tích nước tiểu, phân tích chống sinh vào máu.2. Phân tích bilirubin, biliverdin trong xôn xao gan.3. Phát hiện Neuropeptide nội sinh vào dịch ngoại bào của não v.
SẮC KÝ LỎNG VÀ NHỮNG ĐIỀU CẦN BIẾT!

Phương Pháp Sắc ký Lỏng Là Gì?

Sắc ký kết lỏng là phương pháp tách sắc ký những chất dựa vào sự phân bố khác nhau của chúng giữa trộn tĩnh với pha động, trong những số ấy pha động là 1 trong những chất lỏng rã qua trộn tĩnh đựng trong cột hoặc trên mặt phẳng phẳng.Quá trình sắc cam kết lỏng đa số dựa trên cơ chế hấp phụ, phân bổ khối lượng, hội đàm ion, loại trừ theo size hoặc cửa hàng hóa học lập thể.

Khi pha tĩnh trên bề mặt phẳng, ta có cách thức sắc ký giấy, sắc đẹp ký phiên bản mỏng. Trong bài xích này, chúng tôi chỉ đề cập mang đến trường phù hợp khi trộn tĩnh đựng trong cột. Sắc ký lỏng ngày này thường sử dụng những hạt nhồi rất bé dại và áp suất kha khá cao được call là sắc cam kết lỏng hiệu năng cao (HPLC).

HPLC cùng UPLC Là Gì?

HPLC – high performance liquid chromatography – sắc ký lỏng tính năng cao, trước đó được điện thoại tư vấn là sắc ký kết lỏng áp suất cao. HPLC là 1 trong trong những công nghệ chiếm ưu núm và được sử dụng rộng thoải mái nhất trong số phòng thí nghiệm phân tích trong 30 năm qua. Khối hệ thống HPLC hoàn toàn có thể xử lý áp suất lên đến 6000 psi.

Xem thêm: Những điều cần biết về hệ thống giáo dục anh quốc anh, oxford sixth form college

UPLC – Ultra Performance Liquid Chromatography – sắc ký kết lỏng cực kỳ hiệu suất. UPLC đang trở thành nền tảng HPLC tiêu chuẩn chỉnh hiện đại thế nên mạnh của chính nó trong vấn đề tang lượng mẫu mã chảy qua, kết quả sắc ký, độ nhạy và giảm thời gian chạy. Khối hệ thống UPLC hoàn toàn có thể xử lý áp suất lên đến mức 15000 psi.

*

Cả HPLC cùng UPLC số đông là kỹ thuật sắc cam kết lỏng được sử dụng để bóc các thành phần khác nhau của các hợp chất tất cả trong lếu láo hợp, áp dụng áp suất cao để đẩy dung môi qua những cột. Tuy nhiên, UPLC chuyển động ở áp suất cao hơn và được cho phép kích thước hạt trong cột bé dại hơn. Chính vì vậy, UPLC nâng cao độ phân giải với độ nhạy, tiêu tốn dung môi thấp hơn cùng rút ngắn thời gian chạy.

Cấu tạo nên Thiết Bị Sắc ký kết Lỏng

Thiết bị sắc cam kết lỏng bao gồm hệ thống bơm, bộ phận tiêm mẫu, cột sắc đẹp ký, đầu dò (detector) với một khối hệ thống thu nhận, xử trí dữ liệu. Pha động được cung ứng từ một hoặc vài ba bình chứa và chảy qua cột, thường thì với vận tốc không đổi và kế tiếp chạy qua detector.

Cách buổi giao lưu của hệ thống bơm

Trong sắc ký kết lỏng, khối hệ thống bơm yêu cầu giữ đến pha động luôn chảy cùng với một lưu lượng không đổi. Những chuyển đổi áp suất sẽ được giảm thiểu, ví dụ mang đến dung môi chạy sang một thiết bị bớt xung. Hệ thống bơm có mặt áp suất cho nên vì thế ống dẫn và khối hệ thống nối đề nghị là loại chịu được áp suất này. Những bơm hoàn toàn có thể được đính thêm với thiết bị nockout bỏ bong bóng khí.

Hệ thống tinh chỉnh và điều khiển bằng bộ vi xử lý có công dụng cung cung cấp pha hễ hằng định hoặc biến hóa tỷ lệ nguyên tố rửa giải (rửa giải gradient) theo một công tác xác định. Nếu như rửa giải gradient, hệ thống bơm lấy những dung môi xuất phát từ 1 vài bình đựng và các dung môi có thể được xáo trộn ở áp suất tốt hoặc áp suất cao.

Cách chuyển động của phần tử tiêm mẫu

Mẫu thử được đưa vào dòng xoáy pha động hoặc vào vị trí gần đầu hoặc đầu cột nhờ một bộ phận tiêm mẫu bao gồm khả năng chuyển động ở áp suất cao. Hoàn toàn có thể dùng vòng chứa mẫu test thể tích thắt chặt và cố định hoặc thiết bị có thể tích cầm đổi.

Có thể tiêm mẫu bằng tay hoặc từ động. Tiêm mẫu thủ công bằng tay dễ gây nên sai số đo, thể tích tiêm vào vòng cất mẫu ko đủ, nên yên cầu người thao tác phải có kĩ năng tốt, thuần thục.

Nên thực hiện loại pha tĩnh làm sao trong sắc ký lỏng?

Có hai một số loại pha tĩnh được sử dụng trong sắc cam kết lỏng là trộn tĩnh dạng rắn cùng pha tĩnh dạng lỏng. Từng dạng lại có nhiều loại không giống nhau, tùy theo điểm lưu ý của chất đề xuất tách, kỹ thuật bóc mà lựa chọn pha tĩnh phù hợp.

Silica (silic dioxyd), nhôm oxyd hoặc than graphite xốp hay sử dụng trong sắc ký kết pha thuận, quá trình phân tách dựa bên trên sự khác nhau về tài năng hấp phụ với (hoặc) phân bố khối lượng.Nhựa hoặc polymer chứa những nhóm chức axit hoặc bazo, sử dụng trong sắc ký dàn xếp ion, thực hiện cơ chế thảo luận ion để tách các chất phân tích dựa trên những điện tích tương xứng của chúng.Silica xốp hoặc polymer, thường dùng trong sắc ký kết lọc gel (sắc ký kết rây phân tử), dựa trên sự không giống nhau về kích cỡ phân tử để tách bóc các chất, khớp ứng với sự thải trừ không gian.Rất những chất mang biến đổi hóa học được làm từ polymer, silica gel hoặc than graphite xốp được dùng trong sắc ký kết lỏng đảo pha. Trong chuyên môn này, thừa trình tách bóc cơ phiên bản dựa trên sự phân bổ phân tử những chất giữa pha cồn và pha tĩnh.Pha tĩnh là loại biến hóa hóa học đặc biệt, ví dụ như dẫn xuất của cellulose hoặc amylose, protein hoặc petid, cyclodextrin… thường được sử dụng để bóc tách các đồng phân đối quang quẻ (sắc ký đối quang).

Pha động gồm vai trò ra làm sao trong sắc ký kết lỏng?

Pha động đề xuất được lựa chọn thích hợp để đạt kết quả phân bóc tốt nhất. Hóa học rửa giải này được chọn dựa vào độ phân cực của nó so với mẫu và trộn tĩnh.

Với trộn tĩnh hấp phụ phân cực mạnh bạo như alumin, dung môi phân cực được thực hiện làm pha động sẽ ảnh hưởng pha tĩnh hấp phụ, rất có thể làm dịch chuyển các phân tử của mẫu trong các thành phần hỗn hợp và hoàn toàn có thể làm cho những thành phần chủng loại rửa giải thay đổi nhanh chóng. Điều này vẫn làm mẫu ít bị phân tách, do vậy tốt nhất có thể nên ban đầu rửa giải bởi dung môi bao gồm độ phân rất thấp hơn để rửa giải những thành phần bị hấp phụ yếu vào trộn tĩnh trước.

Dung môi cũng rất có thể được biến hóa trong thừa trình bóc tách để chuyển đổi độ phân cực và cho nên vì thế rửa giải những thành phần khác nhau một phương pháp kịp thời hơn. Cách thức này khôn cùng giống phương pháp phân bóc tách gradient được sử dụng trong sắc cam kết lỏng tính năng cao (HPLC).

Cột sắc ký

Pha tĩnh vào sắc cam kết lỏng thường xuyên là chất rắn dung nạp tốt; một hóa học rắn có thể giữ những hạt khí hoặc chất lỏng trên mặt phẳng bên xung quanh của nó.

Đầu tiên, lối ra khiêm tốn của cột được cắm bằng bông thủy tinh hoặc một tấm xốp để nâng đỡ vật tư nhồi cột và giữ cho nó không thoát ra khỏi ống. Sau đó chất rắn hấp phụ (thường là silica) được đóng góp chặt vào ống thủy tinh để triển khai cột tách.

Việc nhồi trộn tĩnh vào cột thủy tinh phải được thực hiện cẩn thận để tạo ra sự phân bố nguyên vật liệu đồng đều. Sự phân bố đồng hầu hết của hóa học hấp phụ vào vai trò rất quan trọng đặc biệt để sút thiểu sự hiện hữu của bọt bong bóng khí với / hoặc những kênh trong cột.

Để xong việc sẵn sàng cột, dung môi được thực hiện làm pha rượu cồn được gửi qua cột khô. Sau đó, cột được biết “làm ướt” cùng cột phải vẫn tồn tại ướt trong toàn cục thí nghiệm. Khi cột được sẵn sàng chính xác, mẫu mã cần bóc tách sẽ được đặt tại đầu cột ướt.

Những lưu ý về Detector

Các đầu dò thường được áp dụng trong sắc ký lỏng như:

Đầu dò chỉ số khúc xạ (Refractive index detector)Đầu dò UV/Vis
Đầu dò huỳnh quang (Flourescence detector)Đầu dò độ dẫn điện (Conductivity detector)Đầu dò năng lượng điện hóa (Electrochemical detector – ECD)Đầu dò khối phổ (MS)Đầu dò chuỗi diod (PDA)

Trong đó đầu dò UV/Vis với đầu dò chuối diod thường được sử dụng phổ biến nhất. Tùy thuộc vào chất buộc phải phân tích, số lượng giới hạn phát hiện mong mỏi muốn… mà fan ta chọn lựa đầu dò phù hợp.

Ưu Nhược Điểm Của phương thức Sắc ký kết Lỏng

Ưu điểm của sắc ký lỏng:

Có khẳ năng định lượng đồng thời những chất tất cả độ phân cực gần nhau
Đầu dò hiệu năng cao, độ nhạy bén cao
Hữu hiệu vào định lượng những hợp hóa học hữu cơ bao gồm nhiệt thủy phân thấp

Nhược điểm của sắc ký lỏng:

Thời gian gian có tác dụng sạch và bất biến cột sắc ký sau những lần chạy lâu
Tốn các dung môi hữu cơ
So với sắc cam kết khí, sắc ký kết lỏng luôn là kỹ thuật lừ đừ hơn.Sắc cam kết lỏng có thể có đỉnh cao hơn nữa hoặc mở rộng dải và cho nên có độ sắc nét thấp hơn so với sắc ký khí.

Hãy liên hệ công ty chúng tôi để được hỗ trợ tư vấn cụ thể.

Số bên 17, Đường số 12, Khu dân cư Cityland Park Hills, Phường 10, Quận gò Vấp, TP hồ nước Chí Minh

Bài viết liên quan

Trả lời

Email của bạn sẽ không được hiển thị công khai. Các trường bắt buộc được đánh dấu *